Доступные техники идентификации бактерий - продуцентов карбапенемаз: за и против - 5 Российский Конгресс лабораторной медицины 11-13 сентября ...
←
→
Транскрипция содержимого страницы
Если ваш браузер не отображает страницу правильно, пожалуйста, читайте содержимое страницы ниже
Доступные техники идентификации
бактерий - продуцентов карбапенемаз:
за и против
5 Российский Конгресс лабораторной медицины
11-13 сентября, 2019, Москва
Jordi Vila
Отдел клинической микробиологии
Госпитальная клиника
Барселона, Испания
Декларация конфликта интересов
Сообщение о следующих
потенциальных конфликтах
интересов
Тип аффилированности / Название коммерческой
финансовой заинтересованности компании
Получение грантов/поддержка Cepheid, STAT Dx (Qiagen), Astra-
исследований: Zeneca, ABAC Therapeutics
Получение гонораров или Phillips Diagnostics; Roche
компенсации консультационных Diagnostics, Siemens, Shionogi
услуг:
Участие в мероприятиях, MSD
финансируемых компаниями:
Почему бактерии с множественной устойчивостью (MDR, multi-drug resistante) сегодня в центре внимания? • Приводят к терапевтическим неудачам • Высокая смертность • Склонность к распространению • Если пониженный уровень резистентности – трудности его выявления • Дополнительное финансовое бремя для системы здравоохранения • Угроза возвращения в преантибиотическую эру
Задержка в применении рациональной эмпирической антибиотикотерапии (СЕПСИС)
Задержка в применении рацональной эмпирической
антибиотикотерапии (госпитальная пневмония)
Нерациональная терапия
Рациональная терапия
Eur. Respir. Rev. (2007) 16: 33
Быстрые методы диагностики
Быстрая идентификация + определение
механизмов резистентности
• Преимущества
– Применение адекватной антимикробной терапии
– Инфекционный контроль для предотвращения
распространения
– Сокращения затрат мед. учреждения
Определение механизмов
резистентности
• У штаммов из изолированных колоний
• Непосредственно в биоматериале
Определение механизмов
резистентности
• У штаммов из изолированных колоний
• Непосредственно в биоматериале
– Надзор
– Диагностика
Зачем необходимо идентифицировать
β-лактамазы ?
• Выбор корректной терапии
• Эпидемиологические исследования /
инфекционный контроль
Идентификация β-лактамаз • Антибиотикограмма – Указывает на присутствие β-лактамаз (скрининг) – Выявление: • Фенотипический метод • Генотипический метод
ВЫЯВЛЕНИЕ карбапенемаз
Фенотипический тест
Метод HoT TAT Чув. За Против
Низкая цена
Комбинирова Высокий ТАТ (время
10 мин 18-24 ч 90-100% Не требуется
оборота теста)
нные диски оборудование
Метод
двойных 10 мин 18-24 ч 100% = =
дисков
Градиентные
10 мин 18-24h 82-94% = =
полоски
Некоторые среды
обладают низкой
Хромогенные чувствительностью при
определении OXA-48.
среды 3 мин 18-24h 53-100% =
Некоторые штаммы с
гиперпродукцией AmpC и
дефицитом поринов могут
расти.ВЫЯВЛЕНИЕ карбапенемаз
Фенотипический тест
Метод HoT TAT Чув. За Против
CIM Низкая цена
Не дифференцирует
5 мин 8ч 85-100% Не нужно
тест тип фермента
оборудование
Ложно (-) с
Биохим. мукоидными
2 минДетекция карбапенемаз
Identification с использованием
of Acinetobacter at the species level
иммунохроматографии (ИХТ)
NG-Biotech ИХТ
Культура Ректальный
Моча
крови сваб
Положительный 39 32 32 [12]
Отрицательный 102 72 86
Ложно (+) 0 0 0
Ложно (-) 0 2 3 [2]
Всего 141 106 121
Sensitivity 100% 94% 91%
Specificity 100% 100% 100%
[X]: Определение из ректального мазка без обогащенияВЫЯВЛЕНИЕ карбапенемаз Генотипический тест Метод HoT TAT Чув. Rt-PCR 5 мин
Определение резистентности
генотипическим методом
• За
– Скорость
– Высокая чувствительность и специфичность
– Дифференциация типов ферментов
• Против
– Обнаруживают только те гены, которые заложены в тест-системе с
определенными праймерами и зондами.
– Получение ложно(-) результатов при возникновении нового варианта
фермента
– Периодическое появление изолятов, положительных в генетическом
тесте, но in vitro чувствительных к антибиотику, специфичному для
данного механизма резистентностиКровь
Флакон с
гемокультурой
6 – 72 часов
Негатив. Положит. Пробоподготовка
30 мин
культура культура Для MALDI-ToF MS
10 мин Проводится в соотв. с 30 мин
Идентификация Резистентность
- ИХТ
данными по ID бактерииОпределение микроорганизмов методом
MALDI-ToF напрямую из образцов мочи
Центрифуг-е
Низк.скорость
Моча
Посев
Определение кол-ва бактерий
(проточная цитометрия) Центрифуг-е
Выс.скорость
Чувствительность антибиотикам
CMI (2016) 22: 561.e1-6Определение
Identification ofкарбапенемаз напрямую
Acinetobacter at the из
species level
клинического материала
БАЛ с различными карбапенем-резистентными клиническими изолятами Enterobacteriaceae
Eazyplex
Концентрация Xpert Carba-R
Штамм (LAMP)**
(КОЕ/мл) (PCR) (Ct)
(min:seg)
107 17.3 15:00
NDM продуц. K. pneumoniae 103 28.2 18:45
102 30.3 21:12
OXA-48 продуц. K. pneumoniae**
103 29.3 18:00 ** CTXM-15 также
102 31.4 22.05
103 26.7 23:45
был выявлен
VIM продуц. K. pneumoniae 102 28.2 26:15
103 29.2 21:15
NDM продуц. E. Coli 102 32.6 24:89
103 30.0 20:00
OXA-48 продуц. E. Coli 102 33.3 23:12
103 29.1 19:06
VIM продуц. E. Coli 102 33.5 22:56
103 31.4 21:15
KPC продуц. E. asburiae 102 33.8 24:80
LAMP and PCR могут быть использованы для определения карбапенемаз напрямую из
респираторных образцов
TAT - 50 мин для ПЦР и 30 мин для LAMP; стоимость 40€ и 45€, соответственно
Vergara A. (2017) submitted for publicationОпределение
Identification ofкарбапенемаз напрямую
Acinetobacter at the из
species level
клинического материала
БАЛ с различными карбапенем-резистентными клиническими
изолятами A. baumannii
Концентрация LAMP (min:seg)
Штамм
(КОЕ/мл) Eazyplex
103 14:00
OXA-23 продуц. A.baumannii
102 16:15
103 12:50
OXA-40 продуц. A.baumannii
102 13:15
103 16:10
OXA-58 продуц. A.baumannii
102 18:30
LAMP можно использовать для определения карбапенемаз напрямую из
респираторных образцов. Полуколичественный анализ позволяет
дифференцировать инфекцию и колонизацию.Образцы из нижних
дыхательных путей
Окраска по Граму
1 час
Посев PCR детекция
Вирусов и атипичных бактерий*
5 часов
(+) +
культура 30 мин
qPCR или qLAMP
or qLAMP
бактерии**
Bacteria*
+
ID + AST Резистентность
Resistance
AST - PCR - PCR
- LAMP- LAMP
* 17 вирусов + L. pneumophila, M. pneumoniae, Ch. pneumoniae и B. pertussis
** S. pneumoniae, H. influenzae, M. catharralis, S. aureus, E. coli, K. pneumoniae, P. aeruginosa, A. baumanniiВЫВОДЫ Клинические данные свидетельствуют, что ранняя детекция резистентных патогенов позволяет как можно раньше назначить адекватную антимикробную терапию, тем самым снижая смертность. Для быстрой детекции карбапенемаз доступно множество фенотипических и генотипических методов Для рутинного скрининга и исследований мы используем хромогенные среды. Желательно по возможности комбинировать фенотипические (ИХТ) и генотипические методы (LAMP)
Вы также можете почитать
