ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ПОПУЛЯЦИИ КЛЕТОК ЛИМФОМЫ NK/Ly
←
→
Транскрипция содержимого страницы
Если ваш браузер не отображает страницу правильно, пожалуйста, читайте содержимое страницы ниже
Оригинальные работы Введение. Для выявления и идентификации
углеводных детерминант на клеточной поверх
ности в качестве зондов применяют лектины
и моноклональные антитела. Существующие
методические подходы для выявления лекти
нов, связанных с тканевыми и клеточными
УДК 576.31:577.112.85:576.385.5
структурами, можно разделить на две группы:
М.М. ЛУЦИК 1, А.М. ЯЩЕНКО 1, В.И. КОВАЛИШИН 1, прямые методы, в которых используют лекти
О.Е. ПРИДАТКО 3, Р.С. СТОЙКА 2, М.Д. ЛУЦИК 2 ны, меченные флюорохромами, биотином, фер
1
Львовский национальный медицинский университет ментами и т.п. [1–3], и непрямые иммунохими
им. Д. Галицкого ческие методы, в которых для выявления свя
2
Институт биологии клетки НАН Украины, Львов
3
Институт экспериментальной патологии, онкологии
занного лектина применяют специфичные ме
и радиобиологии НАН Украины, Киев ченые антитела или лиганды [4–6]. Вторая
E0mail: lootsik@cellbiol.lviv.ua, stoika@cellbiol.lviv.ua группа методов представляется более рацио
нальной, так как первичную обработку образца
ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ПОПУЛЯЦИИ проводят нативным лектином, что исключает
КЛЕТОК ЛИМФОМЫ NK/Ly возможность изменения его углеводной специ
фичности при синтезе меченых производных.
И ЛЕЙКОЗА L1210 Новые возможности этого подхода открылись
ПО УГЛЕВОДНОЙ СТРУКТУРЕ при использовании коллоидного золота в качес
КЛЕТОЧНОЙ ПОВЕРХНОСТИ: тве метки с последующим выявлением микро
частиц золота с помощью солей серебра (im
ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЙ munogold silver staining, IGSS), что позволяет
АНАЛИЗ СВЯЗЫВАНИЯ ЛЕКТИНОВ проводить исследование с помощью светоопти
ческой и электронной микроскопии [7–10].
Применение названного метода ограничи
вается главным образом доступностью соот
ветствующих антилектиновых антител. Наибо
лее полный набор антител к лектинам произ
водит фирма «E.Y. Laboratories» (США). Анти
тела к нескольким лектинам также предлагает
фирма «SigmaAldrich» (США).
Цель настоящей работы состoяла в иссле
довании поверхностных углеводных детерми
нант клеток экспериментальных опухолей –
Изучали гетерогенность углеводных детерминант
лимфомы NK/Ly и лейкоза L1210, а также их
клеточной поверхности в популяции асцитных клеток
лимфомы NK/Ly и лейкоза L 1210 по признаку связывания
распределения в популяции с помощью не
лектинов чечевицы, пшеницы, арахиса и конканавалина прямого иммуноцитохимического метода де
А. Связанные с клетками лектины выявляли непрямым текции связывания лектинов. Для этого нами
иммунохимическим методом с помощью полученных ав были специально получены поликлональные
торами антилектиновых поликлональных антител, ме антитела, меченные коллоидным золотом, к
ченных коллоидным золотом, с последующей проявкой лектинам с хорошо охарактеризованной угле
ацетатом серебра. Выявлены достоверные различия водной специфичностью (LCL, WGA, PNA)
в уровне связывания конканавалина А клетками NK/Ly [11–14]. В работе описан метод, который по
(67 % Con А+) и L 1210 (7,2 % Con А+). Различия между
зволяет определять соотношение лектинпо
штаммами опухолевых клеток в связывании других лек
тинов не были статистически достоверными. Относи
зитивных и негативных клеток в популяции с
тельно высокое процентное содержание PNA+ клеток помощью светооптической микроскопии, а
может свидетельствовать о значительной степени де также определить локализацию метки на кле
сиалирования мембранных гликопротеинов. точной поверхности с помощью электронной
микроскопии.
Материалы и методы. Исследование прово
© М.М. ЛУЦИК, А.М. ЯЩЕНКО, В.И. КОВАЛИШИН,
О.Е. ПРИДАТКО, Р.С. СТОЙКА, М.Д. ЛУЦИК, 2011 дили на асцитных клетках лимфомы NK/Ly
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2 3М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин и др. и лейкоза L1210 мышей. Штаммы опухолей разом: двукратная промывка аликвоты асцит получены из коллекции экспериментальных ных клеток холодным физраствором, забуфе опухолей Института экспериментальной па ренным фосфатом (ЗФР) путем центрифуги тологии, онкологии и радиобиологии НАН рования 3 мин в пробирках типа Эппендорф Украины. Перевивку опухолей осуществляли по при 1500 об/мин, фиксирование 0,1–0,2 % стандартной методике [15]. Асцит лимфомы раствором глутарового альдегида в ЗФР в те NK/Ly забирали в начальной (7–8й день), чение 15–20 мин при 4 °С, двукратное промы развитой (13–14й день) и терминальной (19– вание холодным TBS, рН 7,4, суспендирование 23й день) стадиях роста опухоли, асцитные в 0,1 М растворе глицина в TBS и выдержива клетки лейкоза L1210 получали на 6–7й ние при комнатной температуре 30 мин или в день роста опухоли. В асцитической жидкости течение ночи при 4 °С, двукратное промывание подсчитывали количество клеток и, в ряде слу холодным TBS, суспендирование в TBS. Даль чаев, анализировали их распределение по раз нейшую обработку клеток лектинами проводи меру, используя для этого гемоцитометричес ли либо немедленно, либо, учитывая продол кую камеру Горяева [16]. жительность процесса, после хранения суспен Антитела к лектинам чечевицы, арахиса и зии при 4 °С в присутствии 0,02 % азида натрия зародышей пшеницы получали иммунизацией не более трех дней. кроликов соответствующим лектином в полном Обработка лектинами: к 450 мкл раствора адъюванте Фрейнда: 0,5–1 мг антигена в 0,5 мл лектина в TBS, содержащем 1 мМ СаСl2 и 1 мM адъюванта вводили в тричетыре точки на спи MnCl2, вносили 50 мкл 50%ной суспензии кле не животного, иммунизацию проводили трех ток в TBS и инкубировали при 4 °С в течение кратно с интервалом между введениями 1 мес. 1,5–2 ч, периодически встряхивая. Конечная Через 2 нед после последнего введения анти концентрация лектинов составляла для кон гена забирали пробы крови объемом 12–15 мл. канавалина А 100 мкг/мл, LcL – 200 мкг/мл, Забор осуществляли несколько раз с интерва WGA – 10 мкг/мл, PNA – 200 мкг/мл. После лом 10 дней. Антитела изолировали аффинной двукратного промывания холодным TBS клет хроматографией на Тгеле [17, 18]. Очищен ки суспендировали в 0,4 мл раствора коллоид ные таким образом препараты антител обладали ного золота, сенсибилизированного соответ достаточно высокой чувствительностью выяв ствующим антителом (для конканавалина А – ления лектинов, поэтому дальнейшей очистки пероксидазой хрена), инкубировали в течение с помощью иммуносорбции на иммобилизиро 1,5–2 ч при 4 °С при периодическом переме ванном антигене не требовалось. шивании. Затем клетки промывали дватри Получение коллоидного золота и абсорбцию раза холодным TBS, из осадка клеток отбирали антител на частицах осуществляли по методу небольшую часть (5–10 мкл), к которой добав Geoghean et al. [19]. К 10 мл раствора коллоид ляли равный объем сыворотки крови мыши, ного золота добавляли 100–130 мкг иммуно и готовили мазки для светооптической мик глобулина, рН 7,2–7,5, или 40 мкг высоко роскопии (фиксация метанолом). очищенной пероксидазы, рН 7,2 (лиганд для Для визуализации отложений коллоидного выявления конканавалина А). Полученные рас золота осуществляли физическую проявку творы стабилизировали добавлением полиэти мазков или клеточной суспензии ацетатом се ленгликоля (мол. масса 20 000 Да) до концент ребра по описанной ранее методике [10]. Маз рации 0,02 %, растворы хранили при 4 °С. Пе ки доводили до воды, наносили несколько ка ред использованием аликвоту раствора колло пель проявляющего раствора ацетата серебра и идного золота концентрировали в 5 раз путем выдерживали при комнатной температуре, кон центрифугирования при 12–18 тыс. об/мин тролируя процесс проявки микроскопически. 30–40 мин, полученный осадок частиц колло Обычно время проявки составляло от 45–60 с идного золота суспендировали в растворе TBS, для WGA до 10–15 мин для LcL. Мазки спо содержащем 0,02 % полиэтиленгликоля [13]. ласкивали дистиллированной водой и высуши Для исследования связывания лектинов ас вали. Микроскопирование и фотосъемку пре цитные клетки обрабатывали следующим об паратов проводили в водной среде. 4 ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2
Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L&1210
Для проявки в суспензии клетки помещали
в проявляющий раствор ацетата серебра в про
бирках Эппендорф на время, установленное
для мазков. Процесс останавливали осаждением
клеток центрифугированием в течение 1 мин
при 1500 мин–1 и двукратным промыванием во
дой. Часть клеточной суспензии оставляли для
подсчета в камере Горяева, остальную фикси
ровали 1%ным глутаровым альдегидом и за
ливали в смолу Эпон812 согласно инструк
ции производителя («Fluka», Швейцария) с
целью приготовления ультратонких и полу
тонких (1 мкм) срезов для электронной и све
товой микроскопии (микротом фирмы LKB,
Швеция). Электронную микроскопию осущес Рис. 1. Цитоморфологическая картина связывания лек
твляли на микроскопе УЭМБ100 (Сумы). тина чечевицы с асцитными клетками NK/Ly (а) и
Полутонкие срезы для световой микроско L1210 (б) при детекции связанного лектина с помо
пии окрашивали, как описано Уикли [20], с щью антител, меченных коллоидным золотом, с пос
небольшой модификацией. Срез погружали в ледующим усилением путем проявки ацетатом серебра
каплю 1%ного раствора толуидинового сине
го в растворителе (15%ный этанол, 15%ный Характеристика популяции асцитных клеток лимфомы
глицерин, 0,02 М трис), выдерживали в течение NK/Ly и лейкоза L 1210 по связыванию лектинов
60–70 мин во влажной камере. После удаления Процентное содержание лектин
красящего раствора и промывания водой на связывающих клеток, М ± σ
срез наносили 50–100 мкл 0,5%ного сафрани NK/Ly,
на Т в 0,01 М трис и прокрашивали в течение Лектин NK/Ly, терми
Лейкоз
10–15 мин. После удаления красителя срез про начальная нальная
L1210
мывали водой, высушивали и заключали в стадия роста стадия
роста (n = 5)
(n = 4)
кедровое масло. Эти операции осуществляли (n = 5)
под бинокулярной лупой.
Цитометрический анализ и количественную Конканавалин А 67,0 ± 12,1 70,6±14,2 7,2±1,4
оценку результатов проводили на мазках и Лектин чечевицы 13,6 ± 2,2 9,2±1,9 8,5±1,7
суспензии клеток в гемоцитометрической ка Агглютинин пшеницы 81,8 ± 7,3 78,4±7,6 95,7±9,4
мере Горяева. При анализе мазков несколько Лектин арахиса 29,8 ± 5,9 24,5±4,9 25,3±5,6
полей зрения фотографировали цифровой ка
П р и м е ч а н и е . В контрольных образцах, где исклю
мерой при определенном увеличении, монти чалась инкубация с лектином, количество псевдопо
ровали кадры в программе «Photoshop» с общим ложительных клеток не превышало 0,5 %, что намно
количеством клеток не менее 300 и подсчиты го меньше стандартного отклонения, поэтому по
вали число лектинположительных (связыва правки на контроль не делали.
ющих) и отрицательных клеток на фотографи
ях. При анализе суспензий водную взвесь кле ческой картины после обработки клеток лек
ток после проявки (см. выше) вносили в камеру тинами предложенным методом. Наиболее чет
Горяева и подсчитывали количество лектинпо ко различия между лектинположительными
ложительных и лектинотрицательных клеток и лектинотрицательными клетками наблюда
(общее число не менее 500). Статистическую лись после обработки PNA, что позволяет диф
обработку результатов проводили в программе ференцировать клетки по этому признаку с
Excell, достоверность различий определяли, меньшей ошибкой. Интенсивность связыва
используя критерий t Стъюдента. ния Con A и LcL была более вариабельной: до
Результаты исследований и их обсуждение. статочно большая часть клеток (около 10–
На рис. 1 представлены примеры цитологи 15 %) имели промежуточную между крайними
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2 5М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин и др.
лейкоза L1210 представлены в таблице. Отме
чены достоверные различия в связывании
Con A клетками исследованных опухолевых
штаммов. Для клеток NK/Ly характерно связы
вание Con A с большей частью клеток популя
ции, что можно интерпретировать как экспони
рование двухантенных Nгликозильных угле
водных цепей на поверхности лектинположи
тельных клеток [11, 14]. В популяции клеток
L1210 содержание углеводных цепей этого типа
существенно меньше. Не выявлено достовер
ных различий в связывании лектинов клетками
NK/Ly в начальной и терминальной стадиях
Рис. 2. Структура асцитных клеток NK/Ly в полутон роста опухоли.
ких срезах (1,5 мкм) при различных способах их обра WGA связывался с большинством клеток
ботки: а – клетки NK/Ly на стадии интенсивного рос обоих штаммов, более интенсивно с клетками
та опухоли, обработка агглютинином пшеницы (WGA) L1210, где практически все клетки являются
без дополнительной окраски среза. Темные дисковид WGAположительными. Названный лектин
ные структуры представляют собой срез апикальной
проявлял высокое сродство к углеводам клеточ
части клетки, в которой наружная поверхность мемб
раны заполнена отложениями серебра; б – клетки
ной поверхности, интенсивное связывание наб
NK/Ly в терминальной фазе роста опухоли, обработка людалось при его концентрации 10 мкг/мл, в то
WGA, окраска среза толуидиновым голубым. Четко про время как для остальных лектинов эффектив
является структура ядер ная концентрация составляла 100–200 мкг/мл.
Интенсивное связывание WGA может быть
обусловлено наличием большого количества
терминальных остатков сиаловых кислот в уг
леводных цепях О и Nтипов [14].
Cравнительно высокий процент PNAпо
ложительных клеток наблюдали в обеих попу
ляциях, при этом он был большим у лимфомы
NK/Ly. Это может быть обусловлено значи
тельной степенью десиалирования углеводных
цепей гликопротеинов преимущественно О
типа на клеточной поверхности. Отмечена об
ратная зависимость между связыванием WGA
и PNA, что можно объяснить соответственно
наличием (WGA +) или отсутствием (PNA +)
терминальных остатков сиаловой кислоты в
Рис. 3. Электронная микроскопия клетки NK/Ly после
обработки WGA (проявку ацетатом серебра не прово
углеводных цепях гликопротеинов.
дили): а – увеличение 8000; б – фрагмент той Особенность светооптического исследова
же клетки после увеличения 70 000, полученного с ния структуры клеток на полутонких срезах
помощью компьютерной обработки первичного изоб (1–1,5 мкм), получаемых по технологии под
ражения готовки препаратов для электронной микро
скопии, состояла в том, что проводку и заливку
значениями интенсивность связывания этих материала в эпоксидную смолу проводили пос
лектинов. Это может быть причиной расхожде ле обработки суспензии клеток проявляющим
ний при субъективной оценке результатов раз раствором ацетата серебра. На неокрашенных
личными исследователями. Результаты опреде срезах клетки четко контурированы отложени
ления процентного содержания лектинполо ями серебра на цитоплазматической мембране
жительных клеток в асците лимфомы NK/Ly и (рис. 2, а). По интенсивности ободка можно
6 ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L&1210 оценить содержание лектинположительных венной проблемой является блокирование ак клеток в популяции. После окрашивания сре тивности собственной пероксидазы объекта; зов толуидиновым голубым или же в комбина в) метка коллоидным золотом с последующим ции его с сафранином очень хорошо выявля усилением сигнала проявкой солями серебра лась структура ядер (ядрышки, эухроматин и позволяет проводить исследования параллель гетерохроматин) (рис. 2, б). Это позволяет осу но электронной и световой микроскопией на ществлять цитометрию структурных элементов тонких и полутонких срезах. Влияние методики ядер и анализировать их изменение при различ гистохимической «окраски» лектинами на ре ных воздействиях, в частности, под влиянием зультат анализа очень хорошо продемонстри химиотерапевтических препаратов на опухо ровано в работе Brooks et al. [4]. При анализе левые клетки. 373 случаев первичного рака груди авторами При электронномикроскопическом иссле установлена очень высокая степень положи довании тонких срезов установлено, что доста тельной корреляции между связыванием лек точную информацию о локализации частиц тина улитки с опухолевой тканью и неблаго коллоидного золота на клетках можно полу приятным прогнозом при непрямом методе чить при увеличении 7000 раз, что позволяет «окраски». В то же время при использовании получать изображение всей клетки. Дальнейшее прямого метода «окраски» конъюгатом лек увеличение изображения до 50–70 000 раз с тин – пероксидаза обнаружена слабая корре помощью фото или компьютерной технологии ляция между этими показателями. позволяет четко увидеть локализацию отдель Существенной особенностью описанного ных частиц коллоидного золота (рис. 3, а, б), нами метода является количественная оценка при этом нет особой необходимости применять результата цитохимической реакции. При сра дополнительную проявку для визуализации внении двух способов подсчета клеток – на частиц золота. Результаты электронномикро фотоотпечатках мазков или в суспензии кле скопического исследования совпадают с дан ток в гемоцитометрической камере – нами ными светооптической микроскопии о лока установлено, что второй способ точнее соот лизации метки на клеточной поверхности и ветствует действительности и дает меньшую интенсивности связывания лектинов, однако ошибку. Это может быть обусловлено более определить количество лектинсвязывающих равномерным распределением клеток в суспен клеток в популяции упомянутым методом не зии, чем на мазках в процессе их приготовле представляется возможным. ния. Кроме этого, подсчет клеток в камере Го Таким образом, выявление связывания лек ряева технически намного проще и быстрее, тинов непрямым иммуногистохимическим ме чем на фотоотпечатках, даже если не учиты тодом с помощью меченых антилектиновых ан вать время, необходимое для съемки, монтажа тител имеет следующие преимущества: а) пер и фотопечати изображения. Суспензия клеток вичная обработка клеток нативными лектинами хорошо сохраняется после окончательной об исключает возможность изменения их углевод работки при 4 °С в присутствии 0,01 % азида ной специфичности вследствие химической натрия, и, кроме того, серебро является анти модификации при введении метки или других септиком. воздействиях; б) чистота контроля, достигаемая Выводы. Оптимальным методом исследова благодаря исключению обработки клеток лек ния углеводных детерминант клеточной по тином. В прямых методах с использованием верхности является непрямой иммунохимичес меченых лектинов редко удается достигнуть кий метод определения связывания лектинов блокирования связывания лектина с углевод с клетками при помощи антилектиновых анти ными детерминантами при помощи сравни тел, меченных коллоидным золотом. Из приме тельно простых углеводовингибиторов вслед ненных нами лектинов более информативными ствие высокого сродства лектина к сложным в плане интерпретации структуры углеводных углеводным группам гликопротеинов. Кроме цепей являются конканавалин А, лектины че этого, при использовании пероксидазы в ка чевицы и арахиса. Агглютинин пшеницы вслед честве метки лектинов или антител сущест ствие высокого сродства к поверхности боль ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2 7
М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин и др.
шинства клеток слабо выявляет различия в тодом за допомогою отриманих нами поліклональних
популяции по углеводным детерминантам кле антилектинових антитіл, мічених колоїдним золотом,
точной поверхности. Разработанный нами ме з наступною проявкою ацетатом срібла. Виявлено до
стовірні відмінності у зв’язуванні конканаваліну А
тод можно применять для изучения изменений
клітинами NK/Ly (67 % Con А+) і L1210 (7,2 % Con А+),
углеводных детерминант поверхности опухоле тоді як відмінності між штамами пухлинних клітин у
вых клеток под воздействием химиотерапев зв’язуванні інших застосованих лектинів не були ста
тических препаратов, а также использовать тистично достовірними. Зазначено порівняно висо
для гистохимического выявления и характе кий вміст PNA+ клітин, що може свідчити про висо
ристики углеводных групп тканевых структур. кий рівень десіалювання мембранних глікопротеїнів.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Сon A – конканавалин А 1. Roth J., Binder M., Gerhard J. Conjugation of lectins
LcL – лектин чечевицы with fluorochromes, an approach to histochemical
PNA – лектин арахиса double labelling of carbohydrate components //
WGA – лектин зародышей пшеницы Histochemistry. – 1978. – 56. – P. 265–273.
TBS – физиологический раствор + 10 мМ трисбуфер 2. Луцик А.Д., Детюк Е.С., Луцик М.Д. Лектины в гис
тохимии. – Львов : Вища шк., 1989. – 141 с.
3. Шалай О.О., Логінський В.Є. Гліканові структури
M.M. Lutsyk, A.M. Yashchenko, V.I. Kovalyshyn,
мембрани лімфоцитів у хворих на хронічну лімфо
O.E. Prydatko, R.S. Stoika, M.D. Lootsik
їдну лейкемію // Онкология. – 2005. – 7, № 1. –
HETEROGENEITY OF CELL POPULATION C. 19–22.
OF LYMPHOMA NK/Ly AND LEUKEMIA L1210 4. Brooks S.A., Lymboura M., Schumacher U., Leathem
ACCORDING TO CARBOHYDRATE A.J. Histochemistry to detect Helix pomatia lectin bind
STRUCTURE OF CELL SURFACE: ing in breast cancer: methodology makes a difference //
IMMUNOCYTOCHEMICAL ANALYSIS J. Histochem. Cytochem. – 1996. – 44. – P. 519–524.
OF LECTIN BINDING 5. Dolapchieva S., Eggers R., Kuhnel W. N and Rcad
The heterogeneity of tumor cell populations according herins expression in the rat sciatic nerve demonstrated
to binding of lectins from lentil (LcL), wheat germs by postembedding immunogold method on semithin
(WGA), peanut (PNA) and concanavalin A was investigat sections // Ann. Anat. – 2001. – 183. – P. 405–411.
ed on a model of murine NemethKellner lymphoma 6. Helliot B., Panis B., Busogoro J.P., Sobry S., Poumay Y.,
(NK/Ly) and leukemia L1210. Bound lectins were detect Raes M., Swennen R., Lepoivre P. Immunogold silver
ed by indirect immunochemical method using home staining associated with epifluorescence for cucumber
obtained polyclonal antilectin antibodies and immunogold mosaic virus localization on semithin sections of
silver staining (IGSS) technique. Significant differences in banana tissues // Eur. J. Histochem. – 2007. – 51. –
binding of Con A were revealed between NK/Ly (67 % Con P. 153–158.
A+) and L1210 (7,2 % Con A+) cells, while the differ 7. Holgate C.S., Jackson P., Cowen P.N., Bird C.C.
ences in binding of other lectins with both types of tumor Immunogoldsilver staining: new method of immuno
cells were not significant. A relatively high percentage of staining with enhanced sensitivity // J. Histochem.
PNA+ cells was registered that can indicate a high degree Cytochem. – 1983. – 31. – P. 938–944.
of desialization of membrane glycoproteins. 8. Springall D.R., Hacker G.W., Grimelius L., Polak J.M.
The potential of the immunogoldsilver method for
М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.І. Ковалишин, paraffin sections // Histochemistry. – 1984. – 81. –
О.Ю. Придатко, Р.С. Стойка, М.Д. Луцик P. 603–608.
9. Taatjes D.J., Schaub U., Roth J. Light microscopical
ГЕТЕРОГЕННІСТЬ ПОПУЛЯЦІЇ КЛІТИН detection of antigens and lectin binding sites with gold
ЛІМФОМИ NK/Ly І ЛЕЙКОЗУ L1210 labelled reagents on semithin Lowicryl K4M sections:
ЗА ВУГЛЕВОДНОЮ СТРУКТУРОЮ КЛІТИННОЇ usefulness of the photochemical silver reaction for signal
ПОВЕРХНІ: ІМУНОЦИТОХІМІЧНИЙ АНАЛІЗ amplification // Histochem. J. – 1987. – 19. – P. 235–245.
ЗВ’ЯЗУВАННЯ ЛЕКТИНІВ 10. Hacker G.W., Grimelius L., Danscher G., Bernatsky G.,
Вивчали гетерогенність популяції асцитних клітин Muss W., Adam H., Thurner J. Silver acetate automet
мишиної лімфоми НеметаКельнера (NK/Ly) і лейко allography: an alternative enhancement technique for
зу L1210 по зв’язуванню лектинів сочевиці, зародків immunogold silver staining (IGSS) and silver amplifi
пшениці, арахісу і конканаваліну А. Зв’язані з кліти cation of gold, silver, mercury and zinc in tissues // J.
нами лектини виявляли непрямим імунохімічним ме Histotechnol. – 1988. – 11. – P. 213–221.
8 ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L&1210
11. Лахтин В.М. Лектины в исследовании белков та клін. фізіологія і біохімія. – 2006. – 4 (36). –
и углеводов. – М.: ВИНИТИ, 1987. – C. 25–28. C. 16–22.
(Итоги науки и техники, сер. Биотехнология; Т. 2). 17. Belew M., Junti N., Larsson A., Porath J. A onestep
12. Goldstein I., Hayes C. The lectins: carbohydratebind purification method for monoclonal antibodies based
ing proteins of plants and animals // Adv. Carbohydr. on saltpromoted adsorption chromatography on a
Chem. Biochem. – 1978. – 35. – P. 127–340. «thiophillic» adsorbent // J. Immunol. Meth. – 1987. –
13. Хомутовский О.А., Луцик М.Д., Передерей О.Ф. Угле 102. – P. 173–182.
водная специфичность лектинов // Электронная 18. Oscarsson S., Porath J. Covalent chromatography and
гистохимия рецепторов клеточных мембран. – saltpromoted thiophillic adsorption // Anal. Bio
Киев : Наук. думка, 1986. – C. 8–33. chem. – 1989. – 176. – P. 330–337.
14. Osawa T., Tsuji T. Fractionation and structural assess 19. Geoghean W., Ackerman A. Adsorbtion of horseradish
ment of oligosaccharides and glycopeptides by use of peroxidase, ovomucoid and antiimmunoglobulin to
immobilized lectins // Ann. Rev. Biochem. – 1987. – colloidal gold for the indirect detection of concanavalin
56. – P. 21–42. A, WGA and immunoglobulin G on cell surface at the
15. Экспериментальная оценка противоопухолевых electron microscopic level // J. Histochem. Cytochem. –
препаратов в СССР и США / Под ред. З.П. Со 1977. – 25. – P. 1187–1200.
фьиной и др. – М.: Медицина, 1980. – 295 с. 20. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинаю
16. Луцик М.Д., Бойко Н.М., Панчук Р.Р., Стойка Р.С. щих. – М.: Мир, 1975. – C. 298–301.
Кореляція між зростанням розмірів клітин лімфо
ми NK/Ly і зниженням життєздатності клітин та
ефективності прищеплення асциту // Експерим. Поступила 01.12.09
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2 9Вы также можете почитать
