РАЗРАБОТКА, ОБОСНОВАНИЕ И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ВАКЦИНОТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ...
←
→
Транскрипция содержимого страницы
Если ваш браузер не отображает страницу правильно, пожалуйста, читайте содержимое страницы ниже
Экспериментальные исследования, онкоморфология, онкоиммунология
Национальный институт рака, Киев
РАЗРАБОТКА, ОБОСНОВАНИЕ
И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ
ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ
ВАКЦИНОТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ
ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ
СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ
НОВООБРАЗОВАНИЯМИ
В статье приводятся результаты клинической апробации разработанных
в Национальном институте рака противоопухолевых вакцин на основе ден-
дритных клеток (ДК) у больных раком легкого и раком яичника. Изучение
клинической и иммунологической эффективности противоопухолевой вак-
цины на основе ДК, нагруженных лизатом опухолевых клеток, обработанных
цитотоксическими лектинами B. subtilis B-7025, проведено в рамках II фазы
рандомизированных исследований у больных раком яичника III-IV стадии,
а также противоопухолевой вакцины на основе ДК, нагруженных механоак-
тивированными лиофилизированными опухолевыми клетками, — в рамках
III фазы рандомизированных исследований у пациентов с немелкоклеточным
раком легкого (НМРЛ) ІІB-ІІІА стадии. Установлено, что применение ДК-
вакцин в комплексном лечении больных НМРЛ и раком яичника способствует
1 существенному улучшению результатов терапии. Зарегистрировано повы-
шение 5-летней общей выживаемости пациентов с НМРЛ на 25% и раком
яичника на 35%. Включение ДК-вакцины в комплексное лечение больных
НМРЛ и раком яичника позволяет восстановить или усилить противоопухоле-
вые иммунные реакции организма. Для формирования противоопухолевого
специфического иммунного ответа требуется не менее 4 этапов введения
ДК-вакцины. Полученные результаты расширяют перспективу применения
метода вакцинотерапии на основе ДК у пациентов с другими нозологиче-
Н.Н. Храновская, И.А. Крячок, скими формами злокачественных новообразований.
В.Л. Ганул, Л.И. Воробьева,
Ю.А. Гриневич, В.Э. Орел,
О.В. Скачкова, А.В. Ганул, Современная противоопухолевая цитов в периферической крови, является
Н.П. Цип, В.С. Свинцицкий, вакцинотерапия зарекомендовала себя скорее препятствием, чем способствую-
В.М. Совенко, Н.Н. Свергун, как научно обоснованный и один из наи- щим фактором для достижения эффекта
А.И. Горбач более перспективных методов биотерапии при проведении вакцинотерапии [3].
Адрес:
в онкологии [1]. Наиболее полно возмож- В настоящее время большие надежды
Храновская Наталья Николаевна ности противоопухолевой вакцинотерапии в лечении меланомы возлагаются на пре-
03022, Киев, ул. Ломоносова, 33/43 исследованы при меланоме. К сожалению, параты, направленные на блокирование
Национальный институт рака следует отметить, что в ряде последних CTLA-4/B7 и PD-1/PD-1L путей [4].
E-mail: nkhranovska@ukr.net
обзоров, обобщающих результаты круп- Считается, что последующие мас-
ных рандомизированных исследований, штабные исследования эффективности
продемонстрирована довольно низкая противоопухолевых вакцин должны быть
эффективность противоопухолевой вак- сосредоточены на менее иммуногенных
цинотерапии при меланоме — объектив- опухолях с включением больных с ми-
ный ответ зарегистрирован лишь у 3,3% нимальными клиническими признаками
больных [2]. При этом высказывается ги- заболевания. При этом применение про-
потеза, что высокая иммуногенность этой тивоопухолевых вакцин представляется
опухоли и развитие эндогенной иммун- оптимальным в сочетании с основным
Ключевые слова: рак легкого, ной реакции на опухолеспецифические лечением, направленным на уменьшение
рак яичника, противоопухолевая антигены, характеризуемой по наличию опухолевой массы хирургическим путем
вакцина, дендритные клетки, вы- опухольинфильтрирующих лимфоцитов либо с помощью лучевой или химиоте-
живаемость, иммунная система. (TILs) и сенсибилизированных лимфо- рапии, с целью элиминации остаточных
КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ, № 2 (14), 2014Экспериментальные исследования, онкоморфология, онкоиммунология
опухолевых клеток и симптомов заболе- ные конструкции противоопухолевых исследование эффективности дендритно-
вания [5]. вакцин на основе ДК, различающиеся клеточной аутовакцины при добавлении
Большие надежды возлагаются на объ- способами нагрузки ДК опухолевым ее к стандартному хирургическому лече-
единение антигенного опухолевого мате- материалом: нию у больных немелкоклеточным раком
риала с профессиональными антигенпре- • ДК, нагруженные лизатом опухоле- легкого ІІB–ІІІА стадии».
зентирующими дендритными клетками вых клеток (ЛОК), обработанных ци- В рамках исследований реализованы
(ДК). Уникальность функции этих клеток тотоксическими лектинами B. subtilis такие цели:
обосновывается способностью к интер- B-7025 (метод получения ЛОК описан • изучена эффективность включения
нализации, процессингу и презентации в работе Г.П. Потебни и соавторов, противоопухолевой вакцины на ос-
антигенов наивным Т-лимфоцитам в лим- 2003 [10]); нове ДК в комплексное лечение
фоидной системе, инициации мощного • ДК, нагруженные механоактиви- больных раком легкого и яичника
специфического противоопухолевого рованными лиофилизированными в адъювантном режиме;
иммунного ответа, опосредованного опухолевыми клетками (МА ЛФОК) • установлены особенности развития
цитотоксическими Т-лимфоцитами. Ис- (метод получения МА ЛФОК описан клеточно-опосредованного иммун-
пользование ДК в составе противоопухо- в исследованиях В.Э. Орел и соавто- ного ответа у больных раком легкого
левой вакцины в качестве естественного ров [11, 12]). и яичника под влиянием противо-
адъюванта направлено на усиление имму- Доклинические исследования раз- опухолевой вакцины на основе ДК.
ногенности опухолевых клеток, создание работанных противоопухолевых вакцин Все пациенты были извещены о про-
условий для эффективной презентации in vivo с использованием разных схем при- ведении исследований и дали информи-
опухолевых антигенов, преодоление менения, в том числе в различных дозах, рованное согласие на их выполнение. Ис-
местной или системной иммуносупрессии при разных путях введения в организм, следования проводили согласно этическим
путем индукции и поддержания иммунно- в рамках одно- и многоразового введения нормам, принятым законодательством
го ответа, направленного на элиминацию в режиме вакцинотерапии, на разных Украины. Разрешение на их проведение
опухолевых клеток [6]. моделях опухолевого роста продемон- выдано Центральной комиссией по во-
К настоящему времени в мире про- стрировали их значимую противоопухо- просам этики МЗ Украины (протокол за-
ведено более 114 клинических испытаний левую и антиметастатическую активность седания от 05.11.2009 г. № 5.12-1201/КЕ)
I–II фазы с использованием ДК в лечении при применении в монорежиме и суще- и Комиссией по вопросам этики На-
пациентов с более 30 онкологическими ственное повышение лечебного эффекта ционального института рака (протокол
нозологическими формами (меланома — вакцинации в комбинации с хирургиче- заседания от 20.10.2006 г. № 43)
17,5%, рак предстательной железы — ским удалением первичной опухоли [13]. В первое исследование включена
15,8%, опухоли головного мозга — 13,0%, В данной статье приводятся резуль- 81 пациентка с гистологически вери-
онкогематологические заболевания — таты клинической апробации разра- фицированным диагнозом рака яич-
10,5%, рак яичника — 8%, рак грудной же- ботанных противоопухолевых вакцин ника. Их возраст составил в среднем
лезы — 6%, рак почки — 6%, рак легкого — на основе ДК у больных раком легкого 52,8±1,8 года. Распределение больных
6%, рак поджелудочной железы — 3,5%, и раком яичника. в зависимости от гистологической струк-
саркомы мягких тканей — 3%, а также туры опухолей показало, что в обеих
ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ
рак мочевого пузыря, печени, желудка группах преобладали серозные карци-
2 и др. — всего 11,1%) [7]. Есть сообщения Протоколы исследований и характери- номы: в основной группе — 78%, в кон-
о довольно высокой частоте стабилизации стика пациентов. Оценка эффективности трольной — 67,6% (табл. 1).
или даже регрессии опухоли вследствие противоопухолевой вакцины на основе Лечение больных основной и кон-
проведенной ДК-вакцинотерапии. Уже ДК, нагруженных ЛОК, проведена трольной групп предусматривало проведе-
опубликованы положительные результаты у больных раком яичника III–IV стадии ние циторедуктивной операции и 6 курсов
исследования ІІІ фазы вакцинотерапии в рамках II фазы пилотного клинического адъювантной полихимиотерапии (ПХТ)
на основе ДК у больных с метастати- исследования. Анализ эффективности по протоколу СР (цисплатин 100 мг/м2 +
ческим раком предстательной железы. противоопухолевой вакцины на основе циклофосфамид 800 мг/м2 внутривенно).
В этом исследовании использована вак- ДК, нагруженных МА ЛФОК, проведен Распределение больных в основной
цина Sipuleucel-T (также известная как в рамках III фазы клинических испы- и контрольной группах по степени ра-
APC 8015), состоящая из аутологичных таний «Рандомизированное двойное, дикальности оперативних вмешательств
ДК, полученных из лейкоконцентрата проводимое в параллельных группах приведено в табл. 2. Как свидетельствуют
периферической крови больных и нагру-
женных отдельными пептидами. В 2010 г. Таблица 1. Распределение больных раком яичника в группах в зависимости от гистологического
FDA США было одобрено применение строения опухоли
Sipuleucel-T для терапии больных гормо- Гистологическое строение эпителиальных Основная группа Контрольная группа
норефрактерным метастатическим раком злокачественных опухолей яичника (n=41) % (n=40) %
Серозные 32 78,0 27 67,5
предстательной железы [8, 9]. Муцинозные 4 9,8 6 15,0
Таким образом, ДК-вакцинотерапию Мезонефроидные 2 4,9 3 7,5
можно определить как завершение того Недифференцированные 2 4,9 3 7,5
начального периода, когда необходимо Эндометриоидные 1 2,4 1 2,5
было доказать целесообразность ее при- Всего 41 100,0 40 100,0
менения в онкологии. Сейчас основным
Таблица 2. Распределение больных раком яичника в группах по степени радикальности
заданием является изучение возмож-
оперативных вмешательств
ности применения ДК-вакцин при низ-
Основная группа Контрольная группа
коиммуногенных опухолях, создание Вариант циторедуктивной операции
n % n %
эффективных конструкций ДК-вакцин Оптимальная циторедукция (остаточная опухоль 12 29,3 10 25,0
и протоколов их применения для до- отсутствует)
стижения максимальной клинической Субоптимальная циторедукция (остаточная опу- 19 46,3 22 55,0
эффективности. холь 1–2 см в наибольшем измерении)
В Национальном институте рака Неоптимальная циторедукция (остаточная опухоль 10 24,4 8 20,0
>2 см в наибольшем измерении)
МЗ Украины разработаны две оригиналь-
Всего 41 100,0 40 100,0
КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ, № 2 (14), 2014Экспериментальные исследования, онкоморфология, онкоиммунология
Таблица 3. Распределение больных НМРЛ в группах в зависимости от гистологического строения нечном этапе изготовления ДК-вакцины
опухоли непосредственно перед ее введением.
Гистологическое строение опухолей легкого
Основная группа Контрольная группа Уровень одновременной экспрессии анти-
(n=50) % (n=50) % генов CD86 и HLA-DR на ДК, задей-
Железистый рак 24 48 23 46
Плоскоклеточный рак 26 52 27 54 ствованных в презентации антигенов,
Всего 50 100,0 50 100,0 составлял не менее 65%; антигена CD83,
характеризующего степень зрелости
Таблица 4. Распределение больных НМРЛ в группах по степени радикальности оперативных ДК, — не менее 50%. Количество жизне-
вмешательств способных клеток составляло не менее
Вариант циторедуктивной операции
Основная группа Контрольная группа 95%, примесь лимфоцитов — не более 20%.
(n=50) % (n=50) % В среднем за одну инъекцию боль-
Верхняя лобэктомия 23 46 22 44 ным вводили 4,62±0,48•106 ДК, нагру-
Нижняя билобэктомия 2 4 1 2
Нижняя лобэктомия 6 12 4 8 женных модифицированным аутологич-
Пневмонэктомия 19 38 23 46 ным опухолевым материалом.
Всего 50 100,0 50 100,0 Иммунологические исследования. В про-
цессе вакцинотерапии, через 1 мес после
данные табл. 2, у большинства пациентов Основная и контрольная группы каждого ее этапа, осуществляли монито-
основной и контрольной групп прове- больных в обоих исследованиях были ринг состояния клеточного иммунитета.
дены оптимальные и субоптимальные репрезентативны по возрасту, гисто- Для оценки динамики развития антиген-
циторедуктивные операции — 75,6 и 80% логической структуре опухоли, стадии специфического клеточного иммунного от-
соответственно. Лишь у 24,4% больных заболевания, типу оперативных вмеша- вета у больных в ходе вакцинотерапии изу-
основной и 20% контрольной группы вы- тельств и схеме ПХТ. чали активность лейкоцитов в реакции тор-
полнены неоптимальные оперативные Пациентам основных групп после можения миграции лейкоцитов (РТМЛ),
вмешательства. окончания основного лечения про- способность Т-лимфоцитов секретировать
Во второе исследование включены ведена ДК-вакцинотерапия согласно ИЛ-4 и ИФН-γ, ИЛ-2, фактор некроза
100 больных немелкоклеточным раком схеме (рис. 1). Курс вакцинотерапии со- опухоли α (ФНО-α) в присутствии опу-
легкого (НМРЛ) IIB–IIIА стадии. Рас- ставлял 5 введений (этапов) ДК-вакцины. хольассоциированных антигенов (ОАА).
пределение пациентов в зависимости Получение ДК-вакцины и характери- Для изучения влияния вакцинотерапии
от гистологической структуры опухолей стика ДК. Для каждого введения ДК гене- на функциональную активность клеток,
показало, что в обеих группах практически рировали из моноцитов периферической принадлежащих неспецифическому звену
поровну были представлены железистый крови (50–100 мл) больных путем их ин- иммунной системы, определяли цитоток-
и плоскоклеточный рак легкого (табл. 3). кубации в среде RPMI 1640 в течение 8 сут сическую активность (ЦА) натуральных
Больным НМРЛ проведено опера- в присутствии гранулоцитарно-макрофа- киллерных клеток (НКК) и количество
тивное лечение в объеме лобэктомии гального колониестимулирующего факто- CD16+-лимфоцитов в периферической
или пневмонэктомии (табл. 4). 41% ра (ГМ-КСФ) или Г-КСФ, интерлейкина крови больных.
пациентов не позднее чем за 28 дней (ИЛ)-4, интерферона (ИФН)-α и липо Для определения секреторной актив-
до начала иммунотерапии в неоадъювант- полисахарида при температуре 37 °С в ат- ности Т-лимфоцитов использовали метод
3 ном режиме получали ПХТ по схемам: мосфере 5% СО2. На 6-е сутки инкубации двухпараметровой проточной цитометрии,
винорелбин 30 мг/м2 в 1-й и 8-й дни, к незрелым ДК добавляли ЛОК либо с помощью которого одновременно
цисплатин 80 мг/м2 в 1-й день, этопозид МА ЛФОК. До использования ЛОК устанавливали цитокиновый профиль
100 мг/м 2 в 1; 2; 3-й дни; гемцитабин и ЛФОК проверяли на стерильность и от- и субпопуляционный состав лимфоцитов.
1250 мг/м 2 в 1-й и 8-й дни, циспла- сутствие жизнеспособных опухолевых После 7 сут инкубации лимфоцитов в при-
тин 80 мг/м 2 в 1-й день; иринотекан клеток [14]. сутствии 10 мкл МА ЛФОК добавляли
150 мг/м 2 в 1-й день, оксалиплатин Контроль качества ДК включал оценку форболмиристатацетат в концентрации
80 мг/м2 в 1-й день. их фенотипических характеристик на ко- 20 и 3 мкг/мл иономицина, инкубировали
в течение 5 ч при 37 °С и 5% СО2, фикси-
Áîëüíûå ðàêîì ÿè÷íèêà
ровали 4% параформальдегидом и перме-
абилизировали мембрану с помощью 0,1%
ÏÕÒ,
7–10 ñóò 6 êóðñîâ 30 ñóò раствора сапонина. Далее клетки метили
Êóðñ
âàêöèíîòåðàïèè
6 ìåñ
Ïîâòîðíûå êóðñû с помощью моноклональных антител
ÎÏÅÐÀÖÈß
âàêöèíîòåðàïèè, к поверхностному антигену СD3 и вну-
8—14 ñóò 3 êóðñà
триклеточным ИЛ-2 и ИФН-γ и опреде-
Áîëüíûå ðàêîì ëåãêîãî
ляли количество цитокинпродуцирующих
Âàêöèíàöèÿ 1
Âàêöèíàöèÿ 2
Âàêöèíàöèÿ 3
Âàêöèíàöèÿ 4
Âàêöèíàöèÿ 5
Çàáîð îïóõîëåâîé òêàíè
СD3+-лимфоцитов. Результаты выражали
30 30 30 30 в процентах.
ñóò ñóò ñóò ñóò
Для проведения РТМЛ применяли
Ïîëó÷åíèå ËÎÊ èëè цельную гепаринизированную пери-
ÌÀ ËÔÎÊ
ферическую кровь и пятиканальные
капилляры, 10 мкл МА ЛФОК в исполь-
зованной для «нагрузки» ДК концентра-
ции, 10 мкл фитогемагглютинин (ФГА)
в концентрации 5 мкг/мл. Загруженные
Ãåíåðàöèÿ ÄÊ, капилляры центрифугировали в течение
нагруженных ОАА
5 мин при 1000 об./мин и инкубировали
8 ñóò при 37 °С в течение 24 ч. Процент тормо-
Çàáîð ïîðöèè ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè жения миграции лейкоцитов оценивали
по формуле:
Рис. 1. Применение противоопухолевой вакцины на основе ДК у больных НМРЛ Îïûò
õ 100%
и раком яичника Êîíòðîëü
КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ, № 2 (14), 2014Экспериментальные исследования, онкоморфология, онкоиммунология
Таблица 5. Эффективность применения противоопухолевой вакцины на основе ДК у больных в составе комплексной терапии, повыси-
НМРЛ IIB–IIIА стадии лась на 47% по сравнению с таковой в груп-
Группы больных
Общая выживаемость, % пе пациентов, которым проводили только
1 год 2 года 3 года 4 года 5 лет стандартное лечение (отношение шансов
Больные, получавшие ДК-вакцину и стан- 96 89 69 44 39
(ОШ) 0,22; 95% доверительный интервал
дартное лечение
Больные, получавшие лишь стандартное ле- 90 48 22 16 14 (ДИ) 0,13–0,39), безрецидивной — на 36%
чение (ОШ 0,31; 95% ДИ 0,19–0,52). У больных
Статистическая разница между группами pЭкспериментальные исследования, онкоморфология, онкоиммунология
Таблица 6. Эффективность применения противоопухолевой вакцины на основе ДК у больных
6
раком яичника III–IV стадии
ïðîäóöèðóþùèõ ÑD3+ -
Общая выживаемость, %
Êîëè÷åñòâî ÈÔÍ-γ -
5 *
Группы больных
ëèìôîöèòîâ, %
1 год 2 года 3 года 4 года 5 лет
4
Больные, получавшие ДК-вакцину и стандарт-
100 76 61 59 58
ное лечение 3
Больные, получавшие лишь стандартное ле-
77 61 34 28 23 2
чение
Статистическая разница между группами 1
− pЭкспериментальные исследования, онкоморфология, онкоиммунология
цифического противоопухолевого иммун- туация: усиление реакции лейкоцитов
5
ïðîäóöèðóþùèõ ÑD3+ -
4,5 ного ответа. Поэтому мы исследовали спо- на ОАА произошло лишь однократно —
*
собность лимфоцитов больных к секреции после проведения III этапа вакцинотера-
Êîëè÷åñòâî ÈÔÍ-γ -
4
ëèìôîöèòîâ, %
3,5
3
* цитокинов и хемокинов после инкубации пии (рис. 6).
2,5 с антигенным материалом, используемым Особое значение в иммунном ответе
2 для изготовления ДК-вакцины. Такой на вакцинотерапию имеют НКК, кото-
1,5
1 подход позволяет количественно оце- рые способны удалять опухолевые клет-
0,5 нить содержание антигенспецифических ки разных типов, особенно те, которые
0
Äî â/òåð 2 3 4 Т-лимфоцитов и Тх-1/2-направленность имеют сниженный уровень экспрессии
Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè развития иммунного ответа и степень молекул МНС (major histocompatibility
Êîíòðîëü ÎÀÀ их активации. Повышение секреторной complex — главный комплекс гисто-
12 активности лимфоцитов обусловлено совместимости) І и недоступные для
их сенсибилизацией к ОАА под влиянием действия Т-лимфоцитов.
ïðîäóöèðóþùèõ ÑD3+ -
10
Êîëè÷åñòâî ÈË-4 -
ДК-вакцинотерапии. Как показали полученные результаты,
ëèìôîöèòîâ, %
8
6
При анализе результатов иммуно- у больных НМРЛ до начала проведения
4
логического обследования установлено, вакцинотерапии ЦА НКК существенно
*
*
что вакцинотерапия вызывала развитие снижена. Выполнение вакцинотерапии
2
иммунологического ответа у 75% паци- способствует повышению функциональ-
0
Äî â/òåð 2 3 4 ентов в основном за счет вовлечения кле- ной активности и увеличению количества
Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè точно-опосредованного звена иммунной этих клеток уже после I ее этапа. Наиболее
Êîíòðîëü ÎÀÀ системы, без существенных изменений существенные изменения в состоянии
9 в состоянии гуморального звена. этого звена иммунитета отмечают после
Данные, характеризующие секретор- III и IV этапов вакцинотерапии. Однако
öèòîêèíïðîäóöèðóþùèõ
8
ÑD3+-ëèìôîöèòîâ, %
7
6 ную активность лимфоцитов после инку- у больных раком яичника до проведения
Êîëè÷åñòâî
5 бации с ОАА, представлены на рис. 4 и 5. вакцинотерапии мы не отметили суще-
4
3 Из полученных результатов следует, что ственных нарушений как количествен-
2 до начала проведения вакцинотерапии ных, так и функциональных показателей,
1
0
у больных как НМРЛ, так и раком яич- характеризующих активность НКК. Не-
Äî â/òåð 2 3 4 ника в ответ на ОАА происходит развитие которое повышение ЦА лимфоцитов было
Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè иммунного ответа по Тх2-типу. После отмечено лишь после 4-го введения ДК-
ÈÔÍ-γ ÈË-4 III этапа вакцинотерапии реализуется вакцины (рис. 7).
8 переключение типа иммунного ответа Таким образом, наиболее выраженные
с Тх2- на Тх1-зависимый: увеличивается изменения в состоянии клеточно-опос-
ïðîäóöèðóþùèõ CD3+ -
7
Êîëè÷åñòâî ÔÍÎ-α -
6 секреция ИФН-γ CD3+-лимфоцитами, редованного иммунного ответа под дей-
ëèìôîöèòîâ, %
5
4
который является одним из главных ствием терапии ДК-вакциной происходят
3 провоспалительных цитокинов, активи- лишь после III–IV этапа ее проведения.
рующим цитотоксические Т-лимфоциты,
6 2
1 а также моноциты, макрофаги и про- à
Ýòàï ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè
0
Äî â/òåð 2 3 4 дукцию других провоспалительных ÏÇË
Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè цитокинов, и снижается синтез ИЛ-4. 4 *
Êîíòðîëü ÎÀÀ В то же время возрастает уровень секре- *
3
4
ции ИЛ-2 Т-лимфоцитами. *
* *
Функциональное состояние 2
ïðîäóöèðóþùèõ ÑD3+ -
3,5
Êîëè÷åñòâî ÈË-2 -
3 Т-клеточного звена иммунной системы 1 *
ëèìôîöèòîâ, %
2,5
в процессе вакцинотерапии характери- Äî â/òåð
2
1,5 зуется и РТМЛ. Метод основывается 0 20 40 60 80
1 на способности сенсибилизированных Èíäåêñ òîðìîæåíèÿ ìèãðàöèè ëåéêîöèòîâ, %
0,5 Т-лимфоцитов при инкубации с ОАА ÔÃÀ ÎÀÀ
0
Äî â/òåð 2 3 4 выделять цитокины (МИФ, ФНО-α, á
Ýòàï ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè
Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè ИФН-γ) и хемокины, которые вызыва- ÏÇË
Êîíòðîëü ÎÀÀ ют торможение миграции лейкоцитов. 4 *
Считается, что увеличение процента тор- * *
3
Рис. 5. Цитокин-секреторная актив- можения миграции лейкоцитов при взаи- *
ность CD3+-лимфоцитов перифери- модействии с ОАА по отношению к про- 2 *
ческой крови больных раком яичника центу торможения миграции лейкоцитов 1 *
на этапах проведения вакцинотера- в контроле свидетельствует о специфиче- Äî â/òåð
пии на основе ДК. ском иммунном ответе под влиянием про- 0 20 40 60
До в/тер — до вакцинотерапии; ведения ДК-вакцинотерапии. Данный Èíäåêñ òîðìîæåíèÿ ìèãðàöèè ëåéêîöèòîâ, %
*рЭкспериментальные исследования, онкоморфология, онкоиммунология
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Поскольку механизм действия ДК-
30 0,8
ÑD16+ - ëèìôîöèòîâ, õ109/ë
вакцины опосредован активацией либо
Îòíîñèòåëüíîå êîëè÷åñòâî
ИССЛЕДОВАНИЙ * *
Àáñîëþòíîå êîëè÷åñòâî
ÑD16+ - ëèìôîöèòîâ, %
25 0,7
Недостаточная иммуногенность ОАА формированием специфического про- 0,6
20
и повреждение механизма их презентации тивоопухолевого иммунного ответа, 15
0,5
0,4
являются одними из основных причин, что, как правило, занимает от несколь- 10 0,3
обусловливающих ускользание опухоли ких недель до нескольких месяцев, 5
0,2
0,1
из-под иммунологического надзора и, клинический эффект вакцинотерапии 0 0
как следствие, неблагоприятный исход является отсроченным. В связи с этим Äî 1 2 3 4 ÏÇË
â/òåð
онкологического заболевания [15]. Зача- актуальным становится поиск наиболее Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè
стую повреждение механизма презентации значимых «суррогатных» иммунологи- à Îòí. ê-âî Àáñ. ê-âî
ОАА связывают с подавлением активности ческих маркеров для оценки прогноза
30
ДК — главных антигенпредставляющих ее эффективности [18].
клеток иммунной системы. Опухоль рас- Известно, что иммунологический 25 *
*
ÖÀ ëèìôîöèòîâ, %
полагает для этого различными возмож- ответ на ОАА, как и на любые анти- 20
ностями, воздействуя на ДК на стадии гены, состоит из комплекса процессов, 15
дифференцировки гемопоэтических в которых взаимодействуют эффектор- 10
предшественников, снижая их созревание, ные и регуляторные механизмы, тем
5
миграцию, функциональную активность или иным способом задействованные
0
и численность. Поэтому в вакцинотера- на разных этапах специфического и не- Äî 1 2 3 4 ÏÇË
пии рака весьма перспективным является специфического клеточного иммунного â/òåð
Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè
путь индукции дифференцирования ответа на ОАА. Поэтому для обеспечения
и нагрузки ДК антигенами из опухолей максимальной эффективности регуля-
ÑD16+ - ëèìôîöèòîâ, õ109/ë
30 0,45
Îòíîñèòåëüíîå êîëè÷åñòâî
Àáñîëþòíîå êîëè÷åñòâî
торные механизмы должны влиять на раз-
ÑD16+ - ëèìôîöèòîâ, %
in vitro, поскольку с их помощью можно 25 0,40
0,35
усилить именно начальные этапы им- личные звенья иммунитета: как на неспе 20 0,30
мунного ответа на «низкоиммуногенные» цифическое, основой которого является 15 0,25
0,20
антигены, каковыми являются ОАА, функционирование НКК и макрофагов, 10 0,15
0,10
восстановить нарушенные in vivo этапы так и специфическое звено, преиму- 5
0,05
их презентации иммунокомпетентным щественно Т-клеточное. Определение 0
Äî 1 2 3 4 ÏÇË
0
клеткам [16]. ДК являются чрезвычайно уровня развития антигенспецифического â/òåð
перспективной мишенью для терапевти- Т-клеточного иммунного ответа на ОАА Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè
ческих манипуляций иммунной системой, считается базовым показателем в оценке á Îòí. ê-âî Àáñ. ê-âî
которая способна изменить соотношение и прогнозировании клинического ответа 40
«опухоль — иммунная система организма на проводимую активную специфиче- 35 *
скую иммунотерапию [19].
ÖÀ ëèìôîöèòîâ, %
хозяина» в пользу хозяина и увеличить 30
силу иммунного ответа, направленного В нашем исследовании выраженная 25
на опухоль [17]. активация антигенспецифического 20
15
клеточного иммунного ответа зареги-
7 Разумеется, что данный метод пред-
назначен для применения у больных стрирована у больных НМРЛ и раком
10
5
онкологического профиля с адъювант- яичника после проведения III–IV этапов 0
ной целью в случае так называемой ДК-вакцинотерапии. Об этом свидетель- Äî
â/òåð
1 2 3 4 ÏÇË
резидуальной опухолевой болезни. ствует увеличение коэффициента соот- Ýòàïû ÄÊ-âàêöèíîòåðàïèè
При большой опухолевой массе эффек- ношения ИФН-γ-продуцирующих CD3+-
лимфоцитов к ИЛ-4-продуцирующим Рис. 7. Количество и ЦА НКК больных
тивность вакцинотерапии a priori зна-
после взаимодействия с ОАА. Данное НМРЛ (а) и раком яичника (б) на эта-
чительно ниже, что уже показано в ряде
пах проведения вакцинотерапии
клинических исследований [7]. Согласно соотношение определяет баланс между
на основе ДК.
разработанной нами схеме, терапию Tх1- и Tх2-типом иммунного отве-
та. Преобладание CD3+ИФН-γ +- над До в/тер — до вакцинотерапии;
противоопухолевой вакциной на основе
ПЗЛ — практически здоровые люди;
ДК у пациентов с НМРЛ и раком яич- C D3 +ИЛ-4 +-лимфоцитами в количе-
Отн. к-во — относительное количество;
ника проводили в адъювантном режиме ственном отношении свидетельствует Абс. к-во — абсолютное количество;
с целью предупреждения развития ре- об активации именно клеточного звена *рЭкспериментальные исследования, онкоморфология, онкоиммунология
в качестве дополнительного обоснования у пациентов с НМРЛ и раком яичника 8. Higano C., Schellhammer P., Small E. et al. (2009)
Integrated data from 2 randomized, double-blind, placebo-
при назначении и выборе схемы про- требуется не менее 4 этапов введений ДК- controlled, phase 3 trials of active cellular immunotherapy
ведения вакцинотерапии у пациентов вакцины. Выявленные изменения в со- with sipuleucel T in advanced prostate cancer. Cancer,
115: 3670–3679.
со злокачественными новообразованиями. стоянии иммунной системы больных обо- 9. Kantoff P.W., Higano C.S., Shore N.D. et al. (2010)
Полученные результаты демонстри- сновывают целесообразность проведения Sipuleucel T immunotherapy for castration-resistant
руют эффективность метода вакциноте- комплексного иммуномониторинга. prostate cancer. N. Engl. J. Med, 363: 411–422.
10. Патент № 57869 (UA). Спосіб одержання
рапии на основе ДК в лечении больных протипухлинної аутовакцини / Потебня Г.П., Лисо-
ВЫРАЖЕНИЕ
НМРЛ IIB–IIIА стадии и раком яичника венко Г.С., Черемшенко Н.Л. та ін. (Украина); Опубл.
ПРИЗНАТЕЛЬНОСТИ 15.07.2003, Бюл. №7.
III–IV стадии и расширяют перспективу 11. Орел В.Э, Гриневич Ю.А., Дзятковская Н.Н.
его применения у пациентов с другими Авторы выражают признательность и др. (2008) Биоинженерная технология получения опу-
нозологическими формами злокаче- доктору медицинских наук Г.П. Потебне холеспецифического антигена на основе механохими-
ственных новообразований. Кроме того, за сотрудничество при разработке и ис- чески радиационно-гетерогенизированных опухолевых
клеток. Специфічна імунотерапія в онкології / Под ред.
такая противорецидивная терапия обла- следовании эффективности противо- Ю.А. Гриневича. Здоровье, Киев: 31–38.
дает известными преимуществами перед опухолевой вакцины на основе ДК, на- 12. Khranovska N., Orel V., Grinevich Yu. et al. (2012)
Mechanical heterogenization of Lewis lung carcinoma
химиотерапией еще также в цене и пере- груженных ЛОК, обработанных цитоток- cells can improve antimetastatic effect of dendritic cells.
носимости. сическими лектинами B. subtilis B-7025. J. Mech. Med. Biol., 12(3): 1–22.
13. Храновская Н.Н.,Орел В.Э.,Гриневич Ю.А.
ВЫВОДЫ СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ и др. (2007) Влияние механохимически гетерогени-
зированных опухолевых клеток на антиметастатиче-
ЛИТЕРАТУРЫ
Применение противоопухолевой вак- 1. Потебня Г.С., Лисовенко Г.П. (2010) Биоте-
ский эффект дендритных клеток при иммунизации
животных с карциномой Льюис. Журнал АМН України,
цины на основе ДК в комплексном лече- рапия рака: достижения и перспективы. Онкология, 3 (13): 553–566.
нии больных НМРЛ ІІB–ІІІА стадии и ра- 12 (3): 237–241. 14. Храновська Н.М., Гріневич Ю. Я. (2006) Ме-
2. Rosenberg S.A., Yang J.C., Restifo N.P. (2004) тод одержання аутологічної протипухлинної вакцини
ком яичника ІІІ–IV стадии способствует Cancer immunotherapy: moving beyond current vaccines. на основі дендритних клітин. Методичні рекомендації,
существенному улучшению результатов Nat. Med., 10: 909–915. Київ, 8 с.
3. Schreiber T., Raez L., Rosenblatt J.D. (2010)
их лечения. Зарегистрировано улучшение Tumor immunogenicity and responsiveness to cancer
15. Murphy J.F. (2010) Trends in cancer
immunotherapy. Clin. Med. Insights. Oncol., 14: 67–80.
5-летней общей выживаемости пациентов vaccine therapy; The state of the art Semin Immunol, 16. Моисеенко В.М., Балдуева И.А. (2011) Прин-
с НМРЛ на 25% и раком яичника на 35%. 22 (3): 105–112. ципы создания и использования лечебных вакцин
4. Ott P.A., Hodi F.S., Robert C. (2013) CTLA- в онкологи. Рос. онкол. журн., 2: 49–53.
Установлено, что противоопухо- 4 and PD-1/PD-L1 blockade: new immunotherapeutic 17. Tuyaerts S. (2011) Dendritic cell therapy for
левая вакцина на основе ДК является modalities with durable clinical benefit in melanoma oncology roundtable conference. J. Immune Based Ther
patients. Clin. Cancer Res., 19 (19): 5300–9. Vaccines, 9 (1): 10 p.; doi:10.1186/1476-8518-9-1.
эффективным модулятором состояния 5. Moiseyenko V., Imyanitov E., Danilova A. 18. Herzog R., Álvarez-Pasquin M., Díaz C.
иммунной системы больных НМРЛ et al. (2007) Cell technologies in immunotherapy of cancer. et al. (2013) Are healthcare workers’ intentions to vaccinate
и раком яичника, который позволяет Adv. Exp. Med. Biol., 601: 387–93.
6. Palucka K., Ueno H., Fay J., Banchereau J. (2011)
related to their knowledge, beliefs and attitudes?
(a systematic review). GiBMC Public Health.11 p.; doi:
восстановить или усилить противоопу- Dendritic cells and immunity against cancer. J. Intern. 13 :154 171.
холевые иммунные реакции организма. Med., 269 (1): 64–73. 19. Hoos A., Britten C., Huber C., O’Donnell-
7. Galluzzi L., Senovilla L., Vacchelli E. (2012) Tormey J. (2011) A methodological framework to enhance
Для формирования противоопухоле- Dendritic cell-based interventions for cancer therapy. the clinical success of cancer immunotherapy. Nature
вого специфического иммунного ответа OncoImmunology, 1 (7): 1111–1134. Biotechnology, 29: 867–870.
8 Розробка, обґрунтування та оцінка ефективності Elaboration, rationale and clinical benefit of anti-
протипухлинної вакцинотерапії на основі tumor vaccine therapy based on dendritic cells
дендритних клітин у хворих зі злоякісними for patients with malignant neoplasms
новоутвореннями N.M. Khranovska, I.A. Kryachok, V.L. Ganul, L.I. Vorobyova,
Н.М. Храновська, І.А. Крячок, В.Л. Ганул, Л.І. Воробйова, Y.Y. Grynevych, V.E. Orel, О.V. Skachkova, A.V. Ganul, N.P. Tsip,
Ю.Я. Гриневич, В.Е. Орел, О.В. Скачкова, А.В. Ганул, Н.П. Ціп, V.S. Svintsitsky, V.M. Sovenko, N.M. Svergun, A.I. Gorbach
В.С. Свінціцький, В.М. Совенко, Н.М. Свергун, А.І. Горбач National Cancer Institute, Kyiv
Національний інститут раку, Київ Summary. The results of clinical testing of anti-cancer vaccines
Резюме. У статті наводяться результати клінічної апробації based on dendritic cells (DC) developed at the National Cancer
розроблених у Національному інституті раку протипухлинних Institute in patients with lung cancer and ovarian cancer have been
вакцин на основі дендритних клітин (ДК) у хворих на рак легені presented in the article. The study of clinical and immunological
та яєчника. Вивчення клінічної та імунологічної ефективності efficacy of anti-cancer vaccines based on DC loaded with tumor
протипухлинної вакцини на основі ДК, навантажених лізатом пух- lysate of cells treated with cytotoxic lectins from B. subtilis B-7025,
линних клітин, оброблених цитотоксичними лектинами B. subtilis was carried out within the framework of phase II randomized
B-7025, проведено в рамках II фази рандомізованих досліджень trials in patients with ovarian cancer, stage III–IV, the cancer
у хворих на рак яєчника III–IV стадії, а також протипухлинної vaccine based on DC, loaded mechanical — activated lyophilized
вакцини на основі ДК, навантажених механоактивованими tumor cells — within the framework of phase III randomized trial
ліофілізованими пухлинними клітинами, — в рамках III фази in patients with small cell lung cancer (NSCLC), ІІB–ІІІA stages.
рандомізованих досліджень у пацієнтів із недрібноклітинним раком It was found that the use of DC-vaccines in the treatment of patients
легені (НДРЛ) ІІB–ІІІА стадії. Встановлено, що застосування ДК- with NSCLC and ovarian cancer contributes to a substantial
вакцин у комплексному лікуванні хворих на НДРЛ і рак яєчника improvement in the results of their treatment. Improvement of 5-year
сприяє суттєвому поліпшенню результатів їх терапії. Зареєстровано overall survival for NSCLC patients by 25% and ovarian cancer
підвищення 5-річної загальної виживаності пацієнтів із НДРЛ patients by 35% has been registered. Inclusion of the DC-vaccines
на 25% і раком яєчника на 35%. Включення ДК-вакцини в комп to the complex treatment of patients with NSCLC and ovarian cancer
лексне лікування хворих на НДРЛ і рак яєчника дозволяє відновити can restore or enhance anti-tumor immune response of patients.
або підсилити протипухлинні імунні реакції організму. Для фор- At least, 4 stages of DC-vaccine administrations for the formation
мування протипухлинної специфічної імунної відповіді потрібно of anti-tumor specific immune response were required. The obtained
не менше 4 етапів введення ДК-вакцини. Отримані результати results expand perspective of DC-vaccines usage for patients with
розширюють перспективу застосування методу вакцинотерапії other cancers.
на основі ДК у пацієнтів з іншими нозологічними формами Key words: lung cancer, ovarian cancer, anti-cancer vaccine,
злоякісних новоутворень. dendritic cell, survival, immune system.
Ключові слова: рак легені, рак яєчника, протипухлинна
вакцина, дендритні клітини, виживаність, імунна система.
КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ, № 2 (14), 2014Вы также можете почитать
